液相色譜儀是實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)常會(huì)運(yùn)用到的儀器，這里收集匯總了一些關(guān)于液相色譜儀使用的步驟和相關(guān)注意事項(xiàng)，幫助大家更加便捷地使用。

水相中的溶質(zhì)溶解方式

水相中需溶解的無(wú)機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式，因?yàn)榇祟惾芙夥绞剑赡軙?huì)使溶質(zhì)處于“臨界膠團(tuán)濃度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有機(jī)溶劑、溫度劇降等），極易析出少量結(jié)晶；而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白色粉末”的現(xiàn)象。

流動(dòng)相的配制與使用

1、恒度洗脫

一定是將水相與有機(jī)相混合后、抽濾（使用混合型過(guò)濾膜），用一個(gè)管路（如A管）泵入儀器，這是使用的原則。切勿因節(jié)約有機(jī)相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個(gè)管路（一個(gè)純水相、一個(gè)純有機(jī)相）泵入儀器，即便配制了脫氣機(jī)，因?yàn)榇朔N情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。

剩余流動(dòng)相完全可繼續(xù)使用，密封后放置陰涼處；待下次試驗(yàn)時(shí)與新配制的流動(dòng)相混合后抽濾即可。無(wú)需擔(dān)心發(fā)霉、無(wú)機(jī)鹽析出、揮發(fā)、比例不準(zhǔn)等問(wèn)題，這些皆為疑神疑鬼的表現(xiàn)。實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的標(biāo)準(zhǔn)！實(shí)踐吧~

2、梯度洗脫

流動(dòng)相配制最為科學(xué)的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為低比例的水相-高比例的有機(jī)相（英國(guó)藥典幾乎均如此）；

其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為純有機(jī)相；最不科學(xué)的為：A相為純水相、B相為純有機(jī)相，如既有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用了此種方式，建議改為第二種或頭一種方式，否則基線漂移嚴(yán)重，難以進(jìn)行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測(cè)。

梯度洗脫結(jié)束后，建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開(kāi)始下一針測(cè)定。這10分鐘的穩(wěn)定極為關(guān)鍵。切勿短時(shí)間內(nèi)回到初始狀態(tài)，會(huì)對(duì)儀器和色譜柱損傷較大。

色譜柱的安裝

標(biāo)準(zhǔn)SOP應(yīng)為：

取A管路放入流動(dòng)相瓶中→擰松泵頭→流速由0mL/min逐漸升至10mL/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出，持續(xù)10秒→擰緊泵頭→流動(dòng)相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀測(cè)是否呈拋物線狀，持續(xù)5秒→流速逐步降至1.0mL/min →安裝色譜柱，待20秒后，流動(dòng)相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端→手握兩端螺絲帽，擰緊。

以上安裝順序遵循的是：

逐級(jí)排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗(yàn)梯度洗脫連續(xù)一周，頭一針與最末一針主成分保留時(shí)間相差在6秒以內(nèi)。

試驗(yàn)后色譜柱的清洗

1、最為常用的C8柱、C18柱

（1）流動(dòng)相僅為水或甲醇-水時(shí)

繼續(xù)沖洗30分鐘，流速1.0mL/min，柱溫保持試驗(yàn)時(shí)溫度，即可。

（2）水相中有無(wú)機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)先采用純水（或含有2%甲醇），沖洗A管路（試驗(yàn)采用哪個(gè)管路，就要從頭到尾沖洗該管路），時(shí)間30分鐘（如流動(dòng)相中有表面活性劑，適當(dāng)增加時(shí)間），流速1.0mL/min，柱溫可較試驗(yàn)溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再?zèng)_洗30分鐘，流速1.0mL/min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處。

其后如果采用高比例的甲醇沖洗，會(huì)導(dǎo)致殘余的有機(jī)相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導(dǎo)致了色譜柱壽命大為縮短。

2、其他類型色譜柱

查詢獲取如何科學(xué)合理地使用與清洗保存該類型色譜柱的方法，切勿盲動(dòng)，否則導(dǎo)致色譜柱性能急劇下降。

試驗(yàn)順序

工作流程應(yīng)如下進(jìn)行：

1、0~2小時(shí) 配制流動(dòng)相、對(duì)照品和供試品溶液等，切勿催促昨日試驗(yàn)同事。

2、2~3小時(shí) 采用A管路注入流動(dòng)相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脫才用到B管路），平衡1小時(shí)。如流動(dòng)相中有表面活性劑，建議前一晚小流速過(guò)夜，第二天上班后將流速增至1.0mL/min，平衡1小時(shí)后即可開(kāi)始做試驗(yàn)。

3、3~5小時(shí) 測(cè)定空白溶劑，一定要做到基線不漂移后方可開(kāi)始測(cè)定。所謂“不漂移”，通常系指以1.0%自身對(duì)照溶液主成分峰高約20%高度來(lái)設(shè)定的視野范圍觀察所得，切不可設(shè)定得過(guò)小，使得雜質(zhì)峰顯得很突兀、基線抖動(dòng)得很厲害，弄得人很擔(dān)心。

4、5~8小時(shí) 配制完所有樣品，預(yù)試了對(duì)照溶液和供試品溶液，設(shè)定好自動(dòng)進(jìn)樣程序，程序最末一針設(shè)定為小流速過(guò)夜，紫外燈關(guān)閉。切勿設(shè)定為切換至B管路洗脫，此舉得不償失。

5、9~24小時(shí) 放心回家，讓儀器自動(dòng)進(jìn)樣，除非不穩(wěn)定的樣品（配制一份測(cè)定一針）。充分利用下班后的16小時(shí)，做到從容不迫、。如單位還無(wú)自動(dòng)進(jìn)樣裝置，建議向領(lǐng)導(dǎo)申請(qǐng)購(gòu)買，因一臺(tái)自動(dòng)媲美三臺(tái)手動(dòng)。

6、第二天0~0.5小時(shí) 檢查并計(jì)算昨晚試驗(yàn)結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)不良記錄，將流速增至1.0mL/min，平衡30分鐘后，測(cè)定重新配制的該份樣品即可（同時(shí)回校對(duì)照一針）。無(wú)需全部重新測(cè)定，不要過(guò)度謹(jǐn)小慎微。

7、第二天0.5~2.0小時(shí) 如上沖洗色譜柱，交給其后試驗(yàn)同事。