建立一個(gè)合格的PCR實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn):
1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)
這個(gè)區(qū)域?qū)iT(mén)用作樣品的準(zhǔn)備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施:
PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。
組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理,以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。
用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。
DNA樣品應(yīng)該用有專門(mén)的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。
大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。
管子打開(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,而且管子不能用力崩開(kāi),這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。
任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門(mén)用于樣品準(zhǔn)備間,經(jīng)常清洗。
2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問(wèn)題,反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。
3、建立前PCR區(qū)。
該去專門(mén)用于準(zhǔn)備各種反應(yīng),這個(gè)區(qū)域必須保持干凈,而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備,特別是專門(mén)用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。
PCR實(shí)驗(yàn)室
http://www.gzjhsys.com/SonList-1809080.html
http://www.chem17.com/st375196/erlist_1809080.html